在进行动物细胞融合的过程中为什么要进行两次筛选?
在动物细胞融合的过程当中,能是同种细胞融合,也可能是不同种细胞融合,所以出现多种情况。所以第一步首先要筛选出不同种细胞融合的。不同种细胞融合以后,它产生的抗体也可能也是不同的。因为每一种细胞只能产生一种相应的抗体。所以还需要第二次筛选出能够产生我们需要的那种抗体的融合细胞。
第一次筛选的是杂交瘤细胞,因为假如A,B两种细胞融合,会有A,B,AA,BB,AB五种情况,筛选的是AB型细胞,第二次筛选能产生抗体的AB型细胞。 用选择培养基筛选。
植物细胞融合的步骤?
植物细胞融合是植物细胞工程的一个重要分支,是一种突破物种生殖隔离、创造远缘杂种的新途径,原生质体技术还可用于细胞突变体的筛选、细胞器移植和外源DNA的导入。植物细胞融合包括原生质体的制备、细胞融合的诱导、杂种细胞的筛选和培养,以及植株的再生和鉴定等环节。 原生质体的融合方法经历了一个逐步改进和完善的过程。在早期原生质体融合的方法有NaNO3法、高pH/高Ca2+法、PEG(聚乙二醇)法,后来逐渐发展为PEG与高Ca2+、高pH相结合;20世纪80年代初又开始探索使用电融合法,并发展出一些其他方法。这些方法各有特点,但广泛使用的是PEG法和电融合法。 配子-体细胞原生质体融合技术主要借鉴了体细胞原生质体的融合方法。性细胞原生质体对融合处理很敏感,容易与其它原生质体融合。但是因为它的形态、密度等多不同于体细胞原生质体,其融合技术与体细胞杂交有所差异。影响因素主要有融合处理方式、原生质体密度与比率、融合诱导剂的浓度等。性细胞原生质体往往形体小而密度大,为了提高融合效率,通常在提高性细胞原生质体密度的同时,相对降低后者的密度,以寻求最佳比例 原生质体融合的方式 原生质体的融合方式有两种:对称融合和非对称融合。通过这两种融合方式可产生3种类型的杂种:对称杂种、非对称杂种和胞质杂种。
原生质体制备——原生质体融合 原生质体制备:一般采用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶(以品种而异),显微镜下观察,细胞变圆就可以了。离心洗涤除酶,收集原生质体。纯化原生质体。期间注意用等渗溶液。 原生质体融合:化学融合(常用PEG聚乙二醇诱导融合法), 有条件的话电融合更可取,需要用到电融合仪器。最主要和麻烦的是第一步原生质体制备,融合是靠仪器完成的。
动物细胞融合的方法?
1 在体外培养条件下,动物细胞会自发融合,但是频率极低。因此,一般都需要添加具有诱导细胞融合效应的生物或化学药剂,或者采用电融合技术,人为地促进细胞融合。 2细胞融合法 20世纪80年代建立起来的细胞融合技术,是将两种细胞的混合液置于低压交流电场中,使细胞聚集成串珠状,然后施加高压电脉冲,以促使细胞融合。 3紧密排列的细胞,在相互接触的细胞膜之间会出现无蛋白颗粒的脂质区,当受到电击时,这个区域就会被击穿,产生脂双层膜孔,导致细胞之间的细胞质连通,进而发生细胞融合。