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原位杂交,原位杂交技术的原位杂交的基本原理?

时间:2024-05-15 03:06:22

原位杂交技术的原位杂交的基本原理?

原位杂交(in situ hybridization)将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,称为原位杂交。 使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置。 RNA原位核酸杂交又称RNA原位杂交组织化学或RNA原位杂交。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是:在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的RNA核苷酸片段,按核酸杂交中碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交),所形成的杂交体 (Hybrids)经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位杂交技术 经不断改进,其应用的领域已远超出DNA原位杂交技术。尤其在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析,已 成为最有效的分子病理学技术,同时在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面已展示了分子生物学的一重要方向。 FISH是原位杂交技术大家族中的一员,因其所用探针被荧光物质标记(间接或直接)而得名,该方法在80年代末 被发明,现已从实验室逐步进入临床诊断领域。基本原理是荧光标记的核酸探针在变性后与已变性的靶核酸在退火 温度下复性;通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象(即维持其原位)的前提下对靶核酸进行分析。DNA荧光标记探针是其中最常用的一类核酸探针。利用此探针可对组织、细胞或染色体中的DNA进行染色体及基因水平 的分析。荧光标记探针不对环境构成污染,灵敏度能得到保障,可进行多色观察分析,因而可同时使用多个探针,缩 短因单个探针分开使用导致的周期过程和技术障碍。

原位核酸分子杂交技术简称原位杂交(in situ hybridization,ISH)含义是什么?

原位核酸分子杂交技术简称原位杂交(insituhybridization ISH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待检测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合而形成杂交体,然后再应用与标记物相应的检测系统,通过组织化学或免疫组织化学方法在被检测的核酸原位形成带颜色的杂交信号,在显微镜或电子显微镜下进行细胞内定位。这一技术为研究单一细胞中DNA和编码各种蛋白质、多肽的相应mRNA的定位提供了手段,使从分子水平研究细胞内基因表达及有关基因调控提供了有效的工具。可视为组织化学或免疫细胞化学中革命性的突破。原位杂交技术已应用于基础研究如基因组图(Gene mapping),转基因检测,基因表达定位(localizationofgene expression),核DNA和RNA的mRNA的排列和运输(arrangementandtransportof mNA),复制(replication)和细胞的分类(Sortingof cells)。临床研究应用在细胞遗传学(Cytogenetics),产前诊断(Prenatal diagnosis),肿瘤和传染性疾病的诊断,生物学剂量测定(biological dosimetry)和病毒学的病原学诊断等。随着核酸探针的制备,标记方法和基本操作方法的不断改进,新的技术不断涌现,相信在不久的将来,原位杂交技术将会更广泛的被应用于各个学科,并不断为生命科学提供新的资料,开拓新的领域。 ……………… 详细资料请参考:on

原仁杂交技术是什么意思?

原位杂交技术是一种分子生物学技术,用于研究基因RNA或DNA的定位。它利用特定标记的核酸探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程1。原位杂交技术的基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA双键分子的特点。 应用带有标记的DNA或RNA片段作为核酸探针,与组织切片或细胞内待测核酸(RNA或DNA)片段进行杂交,然后可用放射自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在并定位1。

没有原仁杂交,只有原位杂交。 它是一种在组织细胞原位进行的核酸分子杂交技术,敏感度高,特异性强,是当前分子生物学研究的重要手段。

原位杂交是一种技术方法,临床上用途很广,可用于检测多种疾病,例如各种癌变、感染性疾病、遗传代谢性疾病等。原理是人为设计出一些特定序列的核酸分子,做成探针,与待检测的细胞核酸共同孵育,从而达到诊断疾病的目的。 例如癌细胞的核酸是有一些异常片段的,根据这些异常片段做出互补的片段(加入放射性同位素做标志物),经诊断技术显示出来,从而进行分子水平的诊断。